鵝圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）ELISA試劑盒-定性

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒采用間接法測(cè)定標(biāo)本中鵝圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）。用純化的抗原包被微孔板，

制成固相抗原，與樣品中圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗 IgG 抗體，

再與鏈霉親和素-HRP 結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在

HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)

下測(cè)定吸光度（OD 值），與 CUTOFF 值相比較，從而判定標(biāo)本中鵝圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）

的存在與否。

標(biāo)本要求

1．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能

馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟

1. 編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板應(yīng)設(shè)陰性對(duì)照 2 孔、陽(yáng)性對(duì)照 2 孔、空白對(duì)照 1

孔

2. 加樣：分別在陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照 50μl。然后在待測(cè)樣品孔先

加樣品稀釋液 40μl，然后再加待測(cè)樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不

觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，37℃溫育 45 分鐘。

3. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

4. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此

重復(fù) 4 次，拍干。

5. 加生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體：每孔加入生物素標(biāo)記的抗-IgG 抗體 50μl。37℃溫育 30 分

鐘

6. 洗滌：操作同 4。

7. 加鏈霉親和素-HRP：每孔加入 50μl 的鏈酶親和素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育 30

分鐘。

8. 洗滌：操作同 4。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A 50μl，再加入顯色劑 B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

11. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止

液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

結(jié)果判定：

試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔平均值≥1.00; 陰性對(duì)照平均值≤0.20

臨界值（CUT OFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）陰性

陽(yáng)性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為圓環(huán)病毒抗體（CV Ab）陽(yáng)性

注意事項(xiàng)

1．操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行，本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未

用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請(qǐng)避光保存。

6．試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，參考波長(zhǎng)為 630nm

7．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為 2M 的硫酸，使用時(shí)必須

注意安全。

規(guī)格：

96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個(gè)月