進(jìn)口試劑盒講解ELISA法轉(zhuǎn)錄因子活性的特點(diǎn)與流程

    今天是四月份的*天，我們來(lái)給朋友們說(shuō)說(shuō)相關(guān)實(shí)驗(yàn)方法，就是相關(guān)ELISA的，這個(gè)方法的試劑盒在我公司的產(chǎn)品中是非常齊全的，而且種屬也是繁多的。下面我們來(lái)看進(jìn)口試劑盒講解ELISA法轉(zhuǎn)錄因子活性的特點(diǎn)與流程。
我們首先來(lái)看看特點(diǎn)：
1、靈敏度比凝膠遷移實(shí)驗(yàn)高10倍。轉(zhuǎn)錄因子水平小的變化就能對(duì)細(xì)胞功能產(chǎn)生極大的影響，因此，在研究轉(zhuǎn)錄因子時(shí)采用靈敏的方法是非常重要的。
、特異性強(qiáng)。為了保證轉(zhuǎn)錄因子特異與生物素標(biāo)記探針DNA結(jié)合，試劑盒提供了未標(biāo)記寡核苷酸片段（含有與標(biāo)記探針相同的轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點(diǎn)）。此片段能夠與探針競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，減弱信號(hào)強(qiáng)度。突變型的未標(biāo)記寡核苷酸片段則不能與標(biāo)記探針競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子改變信號(hào)強(qiáng)度。此外，抗轉(zhuǎn)錄因子一抗特異與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，與其他蛋白無(wú)交叉反應(yīng)，確保試劑盒的特異性。
3、快速。EMSA需要凝膠電泳，操作費(fèi)時(shí)又不方便。使用轉(zhuǎn)錄因子活性ELISA檢測(cè)試劑盒，能夠在5h內(nèi)得到結(jié)果。
4、方便、安全。不涉及放射性，不用電泳。
5、可同時(shí)檢測(cè)1～96個(gè)樣品。
6、能夠檢測(cè)組織及細(xì)胞樣品。
再一個(gè)就是流程：
1、核蛋白抽提物中轉(zhuǎn)錄因子與生物素標(biāo)記探針結(jié)合形成轉(zhuǎn)錄因子／探針復(fù)合物。
2、轉(zhuǎn)錄因子／探針復(fù)合物與微孔板上鏈親和素結(jié)合固定在微孔板上。
3、抗轉(zhuǎn)錄因子一抗與轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合。
4、HRP酶標(biāo)二抗與一抗結(jié)合。
5、HRP作用于底物發(fā)生顏色改變，顏色深淺與轉(zhuǎn)錄因子DNA結(jié)合活性成正比。 
    由于ArrayStarTM轉(zhuǎn)錄因子活性ELISA試劑盒可以快速、靈敏地檢測(cè)細(xì)胞核提取物中轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性。試劑盒采用96微孔板，標(biāo)記探針是生物素標(biāo)記的雙鏈寡核甘酸片段，含有轉(zhuǎn)錄因子的特異性DNA結(jié)合序列。當(dāng)標(biāo)記探針與細(xì)胞核抽提物一起孵育時(shí)，核抽提物中活性形式的轉(zhuǎn)錄因子與探針特異性結(jié)合，形成轉(zhuǎn)錄因子／探針復(fù)合物。隨后，轉(zhuǎn)錄因子／探針復(fù)合物與鏈親和素包被的微孔板孵育，轉(zhuǎn)錄因子／探針復(fù)合物通過(guò)與微孔板上鏈親和素結(jié)合，被固定在微孔板上。洗去未結(jié)合物，加入特異性一抗，然后加入HRP標(biāo)記的二抗及底物，HRP催化底物發(fā)生顏色改變，根據(jù)顏色深淺即可檢測(cè)轉(zhuǎn)錄因子活性改變。轉(zhuǎn)錄因子活性ELISA方法是建立在ELISA基礎(chǔ)上的高靈敏度的檢測(cè)方法，也用于檢測(cè)哺乳動(dòng)物組織或細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性，比傳統(tǒng)凝膠遷移實(shí)驗(yàn)的靈敏度高10倍，在5h內(nèi)就能完成。不涉及放射性和凝膠電泳，安全簡(jiǎn)便，而且這種微孔板的形式能同時(shí)檢測(cè)1—96個(gè)樣品。
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