尿微量白蛋白的檢測方法

　目前，尿微量白蛋白的檢測方法主要有：ELISA方法、放射免疫法、化學(xué)發(fā)光法、免疫透射比濁法以及免疫熒光法。

　　ELISA方法靈敏性高，但操作步驟多，等待檢測結(jié)果時(shí)間比較長，需要有門的實(shí)驗(yàn)室、業(yè)人員完成，一般用于大批量標(biāo)本的檢測。不適于少量或單份檢測的快速檢測。放射免疫法靈敏度高、操作簡便，測量和數(shù)據(jù)處理易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。但因其為相對定量及存在放射線輻射、污染問題等應(yīng)用較少。化學(xué)發(fā)光法因其特異性、敏感性高、簡便快速、無需外來光源，背景噪音低應(yīng)用廣泛，但其選擇性差、其發(fā)射強(qiáng)度依賴于各種環(huán)境因素，需嚴(yán)格控制外界各種因素。免疫透射比濁法試劑較穩(wěn)定，自動(dòng)化操作減少了人為誤差，但其檢測需核實(shí)的抗原抗體比例，需預(yù)先定值，否則造成誤差。免疫熒光法特異性強(qiáng)、敏感性高、操作簡便、檢測時(shí)間短，即可批量檢測也可單份檢測，是臨床上常用的快速定量檢測方法。

　　（1）尿液標(biāo)本的采集

　　尿常規(guī)檢查所用的隨機(jī)尿標(biāo)本雖常用但不推薦，24小時(shí)尿標(biāo)本不易留取，一般可采用12小時(shí)夜尿（計(jì)量后取0.5－1ml送化驗(yàn)室）；也可采用shou次晨尿或第二次尿，但注意尿液應(yīng)在膀胱內(nèi)超過3小時(shí)。

　　測試應(yīng)離心后采用上清液。測試尿微量白蛋白的時(shí)間：

　　1型糖尿病：發(fā)病5年或12歲以后，每年測1-3次；

　　2型糖尿病：診斷明確時(shí)測試，以后1-3次/年。

　　僅MAU陽性者：每3個(gè)月隨訪檢測。

　　（2）尿微量白蛋白的測定

　　先，應(yīng)多次測定。因?yàn)槟蛑泻康纳下漭^大，單次測定可能會(huì)造成偏差。

　　如shou次測試為陽性則應(yīng)在3-6個(gè)月內(nèi)再測二次以上，如3次中有二次陽性則為早期腎病。

　　（3）檢測原理

　　依據(jù)免疫熒光雙抗體夾心法定量檢測人尿液標(biāo)本中的尿微量白蛋白含量。將檢測緩沖液和人尿液樣本在檢測管中進(jìn)行混合，緩沖液中熒光標(biāo)記的抗人白蛋白抗體和尿液中的白蛋白抗原結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，當(dāng)混合樣本加到檢測板樣品孔內(nèi)后，復(fù)合物通過層析作用擴(kuò)散到硝酸纖維素膜的檢測線上并被檢測線上的人白蛋白抗體所捕獲。因此尿液樣本中白蛋白含量越高，檢測線上復(fù)合物積累量越多。熒光抗體的信號(hào)反映了被捕獲的白蛋白數(shù)量。通過免疫熒光檢測儀可檢測出尿液樣本中白蛋白的濃度。檢測儀默認(rèn)的尿微量白蛋白檢測結(jié)果用mg/L為單位。尿微量白蛋白的檢測范圍是2~300 mg/L，讀數(shù)結(jié)果可jing確到0.01 mg/L。